FOLLETO
PARA
COMPLEMENTAR
EL
APRENDIZAJE
DE
BIOQUIMICA
I
AREA: CIENCIAS DE LA SALUD
ASIGNATURA: laboratorio de
Bioquímica I. MED195.
Guía Para
complementar la 10 ma.
Práctica de Lab.
Bioquímica I
Dr.
Daniel
E.
Rodríguez
C,
M.A.
(Farmacéutico)..
PRACTICA No. 10:
RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES .
- Objetivos: reconocer y diferenciar los esteroides colesterol y ergosterol .
Esteroides
Los esteroides se
encuentran asociados a las grasas. Poseen la estructurara del
ciclopentanoperhidrofunantreno. El colesterol es el esteroide de
origen animal mas conocido y uno de los mas estudiados, su nombre
procede del griego (chole, que quiere decir bilis, por ser el
componente más abundante de los cálculos biliares). Está presente
normalmente en los tejidos. Por ejemplo se calcula que en un hombre
de 80 kilos, hay unos 240 gramos de colesterol. A los médicos por
lo general les gusta ver el colesterol total menor a 200mg/dL , con
un LDL (colesterol malo) inferior a 130 , el límite elevado del
nivel “casi óptimo” , y el HDL (colesterol alto ) superior a 40.
Las plantas contienen
una variedad de esteroles.
El ergosterol es un
esteroide de origen vegetal. Difiere del colesterol por tener en su
estructura dos doble ligaduras adicionales, una entre C7C8
en el anillo B, y la otra en la cadena lateral entre C22-C23.
El ergosterol también
se diferencia del colesterol por llevar un grupo metilo extra en
posición 2,4. Esta sustancia es considerada como una pro-vitamina,
ya que por irradiación con luz ultravioleta adquiere propiedades
antiraquíticas ,como consecuencia de la apertura del anillo B.
“Otros esteroides de
gran importancia bioquímica son las hormonas sexuales, hormonas de
la corteza suprarrenal , vitamina D, glucósidos cardiacos y los
ácidos biliares”.(Asbun ,1972, p.
168)
Los
esteroides se pueden analizar por medios fotométricos, esto es de
manera cuantitativa, para esto se lleva a cabo una reacción química
que desarrolle color. Estas reacciones no son específicas, las dan
todos los esteroides que lleven uno o mas dobles enlaces en el anillo
A o B, los compuestos saturados no desarrollan color.
Reacciones
de
los
esteroides:
-REACCION
DE
LIEBERMAN-
BUCHARD:
en
esta
reacción
se
trata
una
muestra
de
esteroide
en
cloroformo
con
anhídrido
acético
y
ácido
sulfúrico,
se
desarrolla
un
color
purpura
que
pasa
a
azul
verdoso
y
se
estabiliza
en
verde.
-
REACCION
DE
SALKOWSKI:
cuando
se
trata
la
muestra
de
solución
clorofórmica
de
un
esteroide,
se
desarrolla
un
color
rojo-purpura
-
REACCION DE ROSENHEIM: se utiliza para diferenciar al ergosterol del
colesterol, sólo los compuestos que dan la reacción positiva son
aquellos que tienen dos dobles enlaces conjugados. El ergosterol ,por
ejemplo, posee dos dobles enlaces conjugados en el anillo B.
Esta
reacción
consiste
en
tratar
la
muestra
de
solución
clorofórmica
de
un
esteroide
con
una
solución
de
ácido
tricloroacético,
el
desarrollo
de
un
color
rojo
que
cambia
a
azul
pálido
indica
una
reacción
positiva.
Reactivos
-Solución
de colesterol 0.003 M: se pesan 0.116 g de colesterol y se disuelven
en cloroformo ,cantidad suficiente para completar 100mL.
-Solución
de ergosterol 0.003 M:se disuelven 0.119 g de ergosterol
(recientemente recristalizado de etanol) en cloroformo , se completa
el volumen a 100mL.
-Anhídrido
acético ,calidad reactivo.
-H2SO4
concentrado,calidad
reactivo.
-Ácido tricloroacético.
Experimento I :Técnica
: Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos .A uno se le
agrega 2 miL de Solución
de
colesterol
0.003
M
y
al
otro
2
miL
de
Solución
de
ergosterol
0.003
M.
Se
le
agrega
a
cada
tubo
6
miL
de
cloroformo
,
y
10
gotas
de
Anhídrido
acético
,calidad
reactivo.
Se
mezcla
bien
y
se
adiciona
2
gotas
de
ácido
sulfúrico.
Se
deja
reposar
en
la
obscuridad
durante
una
hora
.Seguidamente
transcurrido
ese
tiempo,
se
mide
la
densidad
óptica
en
el
espectrofotómetro.
Empezando
en
380
mμ,
luego
400
mμ,
luego
en
20
mμ
,
hasta
llegar
a
680
mμ.
Se
usa
cloroformo
como
blanco.
Cada
vez
que
cambia
la
longitud
de
onda
se
lleva
la
escala
a
100
%
T
con
el
blanco.
Se
anotan
los
valores
obtenidos
y
se
traza
una
curva
de
absorción
para
cada
uno
de
los
compuestos
,
indicando
la
densidad
óptica
sobre
el
eje
de
las
ordenadas
y
la
longitud
de
onda
ensobre
el
eje
de
las
abscisas.
Se
observara
que
el
colesterol
y
el
ergosterol
tienen
curvas
de
absorción
similares.
Experimento II
REACCION
DE
ROSENHEIM:
Técnica
:
Se
toman
dos
tubos
de
ensayo
bien
limpios
y
secos
.A
uno
se
le
agrega
2
miL
de
Solución
de
colesterol
0.003
M
y
al
otro
2
miL
de
Solución
de
ergosterol
0.003
M.
Se
le
agrega
a
cada
tubo
2
miL
de
solución
de
Ácido
tricloroacético,
6
miL
de
cloroformo
y
se
mezclan
bien
.Después
de
30
minutos
se
mide
la
densidad
óptica
de
cada
una
de
las
soluciones
Empezando
en
380
mμ
,
se
toman
lecturas
sucesivas
incrementando
la
longitud
de
onda
en
20mu
hasta
llegar
a
los
680
mμ,
se
usa
cloroformo
como
blanco
,cada
vez
que
se
cambia
la
longitud
de
onda
se
lleva
la
escala
a
100%
T
con
el
blanco.
Con los datos obtenidos
se construye una curva de absorción para el colesterol y otra para
el ergosterol, anotando la densidad óptica sobre el eje de las
ordenadas y la longitud de onda sobre el eje de las abscisas . El
colesterol al dar una reacción negativa carecerá de de curva de
absorción en la frecuencia señalada , en tanto que el ergosterol
presentara una marcada curva de absorción.
Experimento III:
Obtención del
colesterol de cálculos biliares.( se pueden obtener éstos en un
hospital, hablar con las estudiantes de enfermería).
En un matraz erlenmeyer
de 100 miL se colocan 4 g de cálculos biliares pulverizados y se
revuelven con 40 miL de acetona , mientras se calienta la suspensión
en bañoo de María, hasta disolución del colesterol. La solución
se filtra en caliente , en un embudo previamente calentado. Si el
filtrado esta muy oscuro , se le decolora con 0.1 g de carbón
activado (norita, se puede conseguir en el laboratorio de tecnología
farmacéutica), se vuelve a calentar y filtrar en caliente ,
utilizando dos hojas de papel filtro. Al filtrado se le añaden 20
miL de metanol ,se vuelve a calentar hasta ebullición y se le va
añadiendo agua hasta turbidez, se calienta hasta disolución y se
deja enfriar. Los cristales se recogen por succión , se secan y se
pesan .el filtrado se destila a la mitad de volumen y se deja enfriar
recogiéndose una segunda cosecha.
Hacer la prueba de
LIEBERMAN-
BUCHARD
para
esteroides
insaturados.
Mezclar
5 gotas de cloroformo con 4 gotas de anhídrido acético y 1 gota de
ácido sulfúrico. Tomar con un capilar ,un poco de esta mezcla y
juntarla con 1-2 mg de colesterol, observar los cambios de color en 5
minutos.
Observar y
apuntar_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________.
BIBLIOGRAFIA.
1-Asbun Wady,
Ph.D.(1972). Bioquímica experimental. Santo Domingo R.D. 1-Asbun
Wady, Ph.D.(1972). Bioquímica experimental. Santo Domingo R.D.
2-Brito,Franklin y Monzó
Antonio.(1979).Química Orgánica. Santo Domingo R.D.
3-Casanova, José. (2006). Elementos de
Química Orgánica, Cuaderno de trabajo. Santo Domingo. ED
universitaria _UASD,. Págs. 40-43.
4-Celsi,
Santiago-Iacobucci, Alberto. Química elemental moderna orgánica.
Buenos Aires, Argentina (1964). ED Kapelius. Págs. 235-237.
5-Diccionario de Medicina Océano
Mosby. St. Louis, Estados Unidos. ED Grupo Océano. Pág. 804.
6-De los Santos,
Aminta.(1997-).Química. Secretaria de Estado De Educación R.D.
7-Ege, Seyhan. (1997).
Química Orgánica, Tomo I. ED Reverté .
8-Quillet, Arisitides. Enciclopedia
autodidáctica Quillet. México, 11 edición, 1977. ED Cumbre, SA.
Pág.76.
9- Ouellet, Robert J.(1971).
Introducción a la Química Orgánica. Ohio, EUA . ED Harla. Págs.
145-152.
10-Microsoft Encarta 2007. 1993-2006
Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
11-Nuñez Sellas, Alberto.
Introducción al análisis orgánico. Santo domingo, REP. DOM. ED
Pueblo y Educación. Págs. 265-271
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